Q 使用试剂盒分离外泌体会不会是外泌体融合,如果外泌体融合,该如何解决?查看详情
A通过沉淀试剂盒会使外泌体聚集在一起,但是外泌体之间不会出现融合的现象,可以用1×PBS溶解外泌体沉淀物,充分震荡混匀即可。
Q 纯化的外泌体如何保存?查看详情
A短时间内使用,可在2-8℃保存一周左右,若长时间保存,建议放在-80℃冰箱中,避免反复冻融,另外,最好是使用低吸附蛋白的保存管来保存。
Q 如何鉴定提取的外泌体?查看详情
A外泌体是体细胞分泌的细胞外囊泡群体中一种,直径一般为30-150nm,通常确定外泌体一般需要三个条件:电镜形态观察,颗粒粒径测定和蛋白标志物检测(Western Blot检测CD9,CD81,CD63,Alix,TSG101等)。
Q 外泌体和微囊泡有什么区别?查看详情
A外泌体(30-120nm)的直径比微囊泡(120-1000nm)小,最主要是它们产生机制不同,外泌体主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中,而微囊泡是细胞释放到胞外的膜性囊泡,也含有蛋白质、脂类和核酸等分子。
Q 如何测定外泌体中的蛋白质浓度?查看详情
A测定外泌体中的蛋白质浓度用BCA或者Bradford方法,测定前外泌体需要经过裂解处理。
Q 细胞死亡会影响外泌体分泌吗?查看详情
A细胞死亡或凋亡会影响外泌体的分泌,死亡/凋亡的细胞会释放大量大小不等的囊泡,从而污染外泌体,所以我们建议用健康细胞去研究外泌体。另外,凋亡细胞分泌的是凋亡小体,不是外泌体。